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　　以下是植物花色苷合成酶(ANS)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明綜合整理：

　　BS-4985  植物花色苷合成酶(ANS)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被植物花色苷合成酶(ANS)抗體的酶標(biāo)板孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。TMB底物顯色后，在450nm波長下測定吸光度(OD值)，顏色深淺與樣品中ANS濃度呈正相關(guān)?。

　　二、試劑盒組成

　　• 微孔酶標(biāo)板：12孔×8條(96T)或12孔×4條(48T)

　　• 標(biāo)準(zhǔn)品：0.3mL×6管

　　• 檢測抗體-HRP：10mL(96T)/5mL(48T)

　　• 底物A/B：各6mL(96T)/3mL(48T)

　　• 終止液：6mL(96T)/3mL(48T)

　　• 20×洗滌緩沖液：25mL(96T)/15mL(48T)?

　　三、樣本處理

　　液體樣本：

　　血清：室溫凝固10-20分鐘后，2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘取上清

　　血漿：用EDTA或肝素抗凝后離心

　　組織樣本：按1:5-10比例(mg:μL)加入提取液勻漿，8000g離心10分鐘取上清?

　　四、操作步驟

　　試劑準(zhǔn)備：

　　提前20分鐘取出試劑盒平衡至室溫

　　20×洗滌液按1:19用蒸餾水稀釋?

　　加樣：

　　標(biāo)準(zhǔn)孔：加50μL系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品

　　樣本孔：先加40μL稀釋液，再加10μL樣本(最終稀釋5倍)?

　　孵育：37℃溫育60分鐘

　　洗滌：棄液體，每孔加滿洗滌液靜置30秒后棄去，重復(fù)5次

　　顯色：每孔加底物A/B各50μL，37℃避光顯色15分鐘

　　終止：每孔加50μL終止液?

　　五、結(jié)果計(jì)算

　　• 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　• 根據(jù)樣本OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算濃度?

　　六、注意事項(xiàng)

　　保存條件：未開封試劑盒2-8℃保存，有效期6個(gè)月

　　濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶屬正常現(xiàn)象，需溶解后使用

　　OD值>1時(shí)應(yīng)加大稀釋倍數(shù)，<0.1時(shí)縮小稀釋倍數(shù)?

　　不同批次試劑盒組分不可混用?

　　(注：具體操作請(qǐng)以實(shí)際購買的試劑盒說明書為準(zhǔn))

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