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　　人Ⅲ型原膠原N端前肽(PⅢNP)ELISA試劑盒使用說明書

　　BS-1708 人Ⅲ型原膠原N端前肽(PⅢNP)ELISA試劑盒

　　一、試劑盒簡(jiǎn)介

　　人Ⅲ型原膠原N端前肽(PⅢNP)ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理，用于定量檢測(cè)血清、血漿及相關(guān)液體樣本中PⅢNP的含量?。PⅢNP是III型膠原蛋白合成過程中產(chǎn)生的肽段，其血清水平可作為肝臟纖維化和肝硬化的指標(biāo)?。

　　二、試劑盒組成

　　試劑盒通常包含以下組分(具體以實(shí)際包裝為準(zhǔn))：

　　酶標(biāo)包被板：1×48孔或1×96孔(預(yù)包被捕獲抗體)

　　標(biāo)準(zhǔn)品：通常為凍干粉或液體，濃度范圍常見為62.5-4000pg/mL?

　　樣品稀釋液：3ml×1瓶或6ml×1瓶

　　檢測(cè)溶液A(生物素標(biāo)記抗體)和檢測(cè)溶液B(HRP標(biāo)記物)

　　TMB底物溶液和終止液

　　濃縮洗滌液(20-30倍)

　　封板膜和說明書?

　　三、樣本處理要求

　　血清樣本?：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，收集上清。避免溶血和反復(fù)凍融?。

　　血漿樣本?：使用EDTA、檸檬酸鈉或肝素抗凝，采集后30分鐘內(nèi)2-8℃離心(1000×g，15分鐘)?。

　　組織勻漿?：按1:9重量體積比加入PBS勻漿，5000×g離心5-10分鐘取上清?。

　　細(xì)胞培養(yǎng)上清?：直接1000×g離心20分鐘收集?。

　　注意：NaN3會(huì)抑制HRP活性，含NaN3的樣品不能檢測(cè)?。

　　四、實(shí)驗(yàn)操作步驟

　　試劑準(zhǔn)備?：

　　使用前將所有試劑平衡至室溫(18-25℃)

　　按需稀釋濃縮洗滌液(如20ml濃縮液加580ml蒸餾水)?

　　標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋(常見7-8個(gè)濃度點(diǎn))?

　　加樣與孵育?：

　　分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔

　　加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品100μL/孔，37℃孵育30-90分鐘?

　　洗板5次(每次靜置30秒)，拍干

　　檢測(cè)抗體孵育?：

　　加入生物素標(biāo)記抗體100μL/孔，37℃孵育60分鐘?

　　再次洗板5次

　　顯色與終止?：

　　加入TMB底物90μL/孔，37℃避光顯色15分鐘

　　加入終止液50μL/孔，立即測(cè)定?

　　結(jié)果讀取?：

　　使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)讀取OD值

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度?

　　五、注意事項(xiàng)

　　操作規(guī)范?：

　　不同批次試劑不可混用

　　避免底物接觸金屬器具

　　嚴(yán)格控溫和時(shí)間，建議做雙復(fù)孔?

　　保存條件?：

　　未開封試劑盒：部分組分-20℃保存，部分2-8℃保存(詳見標(biāo)簽)?

　　開封后：酶標(biāo)板加干燥劑密封保存于-20℃，剩余試劑按標(biāo)簽溫度保存?

　　質(zhì)量控制?：

　　板內(nèi)變異系數(shù)應(yīng)<10%，板間變異系數(shù)<10%?

　　回收率應(yīng)在85%-115%范圍內(nèi)?

　　安全事項(xiàng)?：

　　TMB底物有毒性，終止液有腐蝕性，需防護(hù)?

　　避免直接接觸試劑，操作時(shí)穿戴防護(hù)裝備?

　　六、技術(shù)參數(shù)

　　檢測(cè)范圍?：常見62.5-4000pg/mL(不同品牌有差異)?

　　靈敏度?：檢測(cè)限通?！?5pg/mL?

　　精密度?：批內(nèi)CV≤10%，批間CV≤15%?

　　有效期?：一般為6-12個(gè)月(以包裝標(biāo)簽為準(zhǔn))?

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