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　　以下是關(guān)于人I型前膠原氨基端肽(PINP)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明，綜合整理自多個(gè)廠商的標(biāo)準(zhǔn)化操作流程和注意事項(xiàng)：

　　BS-1688人I型前膠原氨基端肽(PINP)ELISA試劑盒

　　一、檢測(cè)原理

　　采用雙抗體夾心法或競(jìng)爭(zhēng)法ELISA技術(shù)，通過(guò)包被抗體捕獲樣本中的PINP抗原，經(jīng)酶標(biāo)抗體結(jié)合后顯色，450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，濃度與吸光度呈正相關(guān)?。

　　二、試劑盒組成

　　預(yù)包被微孔板?：96孔或48孔規(guī)格，含抗PINP抗體?

　　標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉或液體，濃度通常為0-200ng/mL?

　　檢測(cè)抗體?：HRP標(biāo)記或生物素化抗體?

　　底物系統(tǒng)?：TMB溶液(A/B組分)及終止液?

　　洗滌緩沖液?：20×或30×濃縮液，需稀釋使用?

　　三、樣本處理

　　血清/血漿?：

　　采集后室溫靜置30分鐘，3000×g離心10-20分鐘?

　　避免溶血或脂血，-20℃保存時(shí)需分裝防凍融?

　　組織勻漿?：

　　按1:9比例加入PBS勻漿，5000×g離心取上清?

　　四、操作步驟

　　試劑準(zhǔn)備?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后梯度稀釋(如0-32ng/mL)?

　　洗滌液按1:20比例稀釋?

　　加樣孵育?：

　　每孔加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育60-90分鐘?

　　洗滌?：

　　手工洗板需加滿洗滌液靜置1分鐘，重復(fù)5次?

　　顯色?：

　　加入TMB底物避光反應(yīng)15分鐘，終止后15分鐘內(nèi)讀數(shù)?

　　五、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

　　溫度控制?：

　　所有試劑使用前需室溫平衡20分鐘?

　　孵育時(shí)需密封防蒸發(fā)?

　　干擾因素?：

　　避免反復(fù)凍融樣本，高劑量生物素治療需停藥8小時(shí)后采樣?

　　質(zhì)量控制?：

　　建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本做復(fù)孔，板內(nèi)變異系數(shù)應(yīng)<10%?

　　六、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品OD值繪制曲線(建議使用四參數(shù)擬合)?

　　樣本濃度=測(cè)定值×稀釋倍數(shù)(若說(shuō)明書(shū)注明需乘以系數(shù))?

　　七、性能參數(shù)

　　靈敏度?：通常為0.04-6.4pg/mL?

　　回收率?：血清中平均為97-102%?

　　特異性?：不與類似膠原蛋白交叉反應(yīng)?

　　注：以上資料僅供參考，具體不同品牌試劑盒可能存在差異，請(qǐng)以實(shí)際說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)?。

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